Media Nutrient Agar (NA) adalah salah satu media pertumbuhan umum yang paling sering digunakan dalam mikrobiologi untuk menumbuhkan berbagai jenis bakteri dan mikroorganisme non-spesifik. Salah satu merek yang paling populer dan terpercaya di laboratorium adalah HiMedia.

Bagi Anda yang bekerja di laboratorium mikrobiologi, pemahaman mengenai cara menimbang, melarutkan, hingga mensterilkan media menggunakan autoklaf dengan benar sangat krusial untuk mencegah kontaminasi silang. Simak panduan lengkap langkah demi langkahnya di bawah ini!

1. Alat dan Bahan yang Dibutuhkan

Pastikan semua alat dan bahan berikut tersedia di meja kerja atau laminar air flow (LAF) Anda sebelum memulai proses pembuatan:

• Bahan:
  • Bubuk Nutrient Agar HiMedia (biasanya merujuk pada M001 atau spesifikasi produk terkait).
  • Akuades (Air suling / distilled water).
• Alat:
  • Timbangan analitik digital.
  • Erlenmeyer atau botol media schott duran (tahan panas).
  • Gelas ukur.
  • Hot plate stirrer dan magnetic bar (batang pengaduk magnet).
  • Autoklaf laboratorium.
  • Alumunium foil dan kapas/kain kassa untuk penyumbat.

2. Langkah-Langkah Pembuatan Media Nutrient Agar HiMedia

Prosedur penyiapan media harus dilakukan dengan teliti sesuai petunjuk pada label kemasan produk HiMedia (biasanya tertera gram per liter, contohnya ~28 gram per liter akuades).

1. Perhitungan Kebutuhan Bahan: Hitung jumlah bubuk NA HiMedia yang diperlukan berdasarkan volume total yang ingin dibuat.
   
   Massa (gram) = [Konsentrasi pada label (g) / 1000 mL] × Volume yang dibuat (mL)
   
2. Penimbangan: Gunakan timbangan analitik untuk menimbang bubuk HiMedia secara akurat di atas kertas timbang atau kaca arloji.
3. Pencampuran dan Pelarutan:
   • Masukkan bubuk yang telah ditimbang ke dalam labu erlenmeyer.
   • Tambahkan akuades sedikit demi sedikit sambil diaduk agar tidak menggumpal.
   • Tambahkan sisa akuades hingga mencapai volume target yang diinginkan.
4. Pemanasan Awal (Dissolving):
   • Panaskan larutan menggunakan hot plate stirrer sambil diaduk perlahan hingga media mendidih dan seluruh bubuk agar larut sempurna (larutan menjadi jernih dan kekuningan).
5. Penyumbatan Wadah:
   • Tutup mulut erlenmeyer menggunakan sumbat kapas yang dibungkus kassa, lalu lapisi dengan kertas alumunium foil untuk mencegah uap air masuk berlebihan selama di dalam autoklaf.

4. Prosedur Sterilisasi Menggunakan Autoklaf

Sterilisasi adalah tahap paling menentukan agar media bebas dari kontaminasi mikroorganisme asing sebelum digunakan untuk inokulasi bakteri.

• Parameter Standar Autoklaf:
  • Suhu: 121°C (250°F)
  • Tekanan: 15 psi (1 atm di atas tekanan atmosfer)
  • Waktu: 15 hingga 20 menit.